赵鹃1 黄旭2 毛英杰1
Zhao Juan1, Huang Xu2, Mao Yingjie1
摘要:
目的 构建和筛选特异性抑制Dishevelled 2(Dvl2)表达的siRNA载体,为进一步研究Dvl2在破骨细胞分化及骨重建中的作用、筛选调节骨重建潜在靶点而奠定基础。方法 根据目的基因设计5个siRNA靶点,与pMAGic 4.0载体形成重组质粒,转化DH5α感受态细胞,含抗生素的LB琼脂平板上筛选转化子,菌落PCR鉴定阳性克隆,测序验证正确的转化子,质粒抽提,Lipofectamine 2000将质粒瞬时转染RAW264.7细胞,通过绿色荧光信号观察转染,实时定量RT-PCR检测Dvl2基因表达的变化。结果 菌落PCR和测序证实所构建的siRNA质粒目的基因大小、序列与预期相符,能有效抑制RAW264.7细胞Dvl2基因的表达,其中3号质粒抑制效率最高。结论 成功构建并筛选出特异性抑制Dvl2 mRNA表达的siRNA载体,可用于包装病毒颗粒和构建Dvl2表达抑制的稳定转染RAW264.7细胞。