牙龈卟啉单胞菌精氨酸牙龈素催化结构域基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

华西口腔医学杂志

牙龈卟啉单胞菌精氨酸牙龈素催化结构域基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

静1，李昂2，苟建重3，许援朝2，饶国洲2，刘蒸3，谢红帼3

1.上海交通大学附属第六人民医院口腔科，上海 200233；2.西安交通大学口腔医院口腔医学研究中心；3.口腔内科，陕西西安 710004

收稿日期:2006-10-25 修回日期:2006-10-25 出版日期:2006-10-20 发布日期:2006-10-20
通讯作者: 苟建重，Tel：029-87287539
作者简介:许静（1980-），女，陕西人，住院医师，硕士
基金资助:
陕西省科技攻关计划资助项目（2004K11-G4（4））；陕西省卫生厅科学研究基金资助项目（04D36）

Cloning of the RgpAcd Gene of Porphyromonas gingivalis and Its Expression in E. coli

XU Jing1, LI Ang2, GOU Jian-zhong3, XU Yuan-chao2, RAO Guo-zhou2, LIU Zheng3, XIE Hong-guo3

1. Dept. of Stomatology, The Sixth People′s Hospital Affiliated to Shanghai Jiaotong University, Shanghai 200233, China; 2. Research Center for Stomatology, College of Stomatology, Xi′an Jiaotong University, Xi′an 710004，China; 3. Dept. of Oral Medicine, College of Stomatology, Xi′an Jiaotong University, Xi′an 710004，China

Received:2006-10-25 Revised:2006-10-25 Online:2006-10-20 Published:2006-10-20

摘要/Abstract

摘要：

目的克隆牙龈卟啉单胞菌精氨酸牙龈素催化结构域（RgpAcd）基因，并将其置于大肠杆菌中作融合表
达。方法利用PCR技术和基因重组技术，克隆牙龈卟啉单胞菌RgpAcd，然后插入中介载体pMD18-T中并测序鉴定。将目的基因片段插入原核表达载体pET-15b来构建表达质粒pET-15b/RgpAcd。重组原核表达质粒经酶切鉴定后转化大肠杆菌BL21感受态细胞，以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导表达融合蛋白。结果核酸序列测定与分析的结果表明，克隆的1 476 bp基因序列与GenBank数据库中的序列呈现100%同源性；IPTG诱导后的菌体经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳后有一个相对分子质量为5×104的融合表达蛋白产生。结论本实验成功克隆了牙龈卟啉单胞菌RgpAcd基因，并在大肠杆菌中表达了RgpAcd蛋白，为进一步研制重组活载体疫苗奠定了基础。

关键词: 牙龈卟啉单胞菌, 蛋白酶, 原核表达

Abstract:

Objective To clone the catalytic domain gene sequence of RgpAcd of Porphyromonas gingivalis（P.gingivalis） and to induce its fusion expression in E. coli. Methods The desired DNA fragment RgpAcd was obtained by PCR and was separately sequenced and identified by inserting into inter-vector pMD18-T vector. The correctly fragment was linked with and cloned into a prokaryotic expression vector pET-15b. The recombinant expression plasmid which had been confirmed by enzymes digestion was transformed to E. coli competent cells BL21（DE3） and expression of fusion protein was induced by IPTG. Results A 1 476 bp specific fragment was obtained and DNA sequencing showed that the fragment was consistent with those of the published. After induction with IPTG, a fusion protein of 5×104 was visualized on SDS-PAGE gel. Conclusion The protein of RgpAcd will be obtained for further study and its protein was correctly expressed in E. coli BL21 cells.

Key words: Porphyromonas gingivalis, gingipain, prokaryotic expression

许静;李昂;苟建重;许援朝;饶国洲;刘蒸;谢红帼. 牙龈卟啉单胞菌精氨酸牙龈素催化结构域基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达[J]. 华西口腔医学杂志.

XU Jing1, LI Ang2, GOU Jian-zhong3, XU Yuan-chao2, RAO Guo-zhou2, LIU Zheng3, XIE Hong-guo3. Cloning of the RgpAcd Gene of Porphyromonas gingivalis and Its Expression in E. coli[J]. West China Journal of Stomatology.

[1]	郭力嘉, 刘奕彤, 陈颖怡, 徐骏疾, 刘怡. 牙龈卟啉单胞菌来源的脂多糖诱导非酒精性脂肪肝的局部巨噬细胞免疫耐受表型[J]. 华西口腔医学杂志, 2023, 41(4): 385-394.
[2]	姜丹丹, 周政, 沈玉凤, 唐小雪, 缑小蕊, 黄枚钰, 童一洲, 陈苗苗, 余重庆. 黏蛋白-4和基质金属蛋白酶-7在种植体周病中的表达及意义[J]. 华西口腔医学杂志, 2022, 40(1): 45-51.
[3]	张雨薇, 何雨轩, 丁一, 刘程程. 牙龈卟啉单胞菌上调钙结合蛋白1促进牙龈上皮细胞增殖[J]. 华西口腔医学杂志, 2022, 40(1): 93-99.
[4]	尧可, 蔡靖仪, 赵蕾, 吴亚菲, 赵志河, 申道南. 牙龈卟啉单胞菌双组分信号转导系统的研究进展[J]. 华西口腔医学杂志, 2021, 39(1): 88-93.
[5]	王春萌,洪丽华,张志民,王渝. 牙龈卟啉单胞菌在消化系统恶性肿瘤中的作用及机制[J]. 华西口腔医学杂志, 2019, 37(5): 521-526.
[6]	胡婷婷,邹小炎,叶芳. 一个掌跖角化-牙周破坏综合征患者家系组织蛋白酶C基因突变分析[J]. 华西口腔医学杂志, 2019, 37(1): 31-36.
[7]	杨芸,陈珊珊,许春梅,吴亚菲,赵蕾. 牙龈卟啉单胞菌脂多糖刺激巨噬细胞表达髓样细胞触发受体-1的研究[J]. 华西口腔医学杂志, 2018, 36(5): 475-481.
[8]	李传花, 王志峰, 朱丽娜, 范欣, 蓝菁. 牙龈卟啉单胞菌精氨酸特异性牙龈素基因疫苗预防比格犬种植体周围炎的实验研究[J]. 华西口腔医学杂志, 2018, 36(1): 76-81.
[9]	陈正岗, 王树人, 李敬华, 韩金宏, 王奇民, 童磊, 刘文君, 杨芳, 郭庆圆, 郭大伟, 王莹. 体外沉默二牛龙牛儿基转移酶Ⅰ对舌癌细胞迁移和侵袭的影响[J]. 华西口腔医学杂志, 2017, 35(6): 576-582.
[10]	赵妍, 于阳, 寇育荣. 牙龈卟啉单胞菌调控细胞自噬的分子机制研究进展[J]. 华西口腔医学杂志, 2017, 35(6): 654-658.
[11]	张尽美, 赵蕾, 吴亚菲. 牙龈卟啉单胞菌第Ⅸ型分泌系统的研究进展[J]. 华西口腔医学杂志, 2017, 35(5): 538-542.
[12]	陈筑, 宿凌恺. 丹皮酚对牙龈卟啉单胞菌诱导骨髓来源巨噬细胞功能的影响[J]. 华西口腔医学杂志, 2017, 35(2): 139-144.
[13]	任秀云, 王冲, 刘欣, 李豪, 马千惠, 林牧, 石学雪, 高晋华. 口腔干预措施对牙周炎大鼠颈动脉牙龈卟啉单胞菌检出量及C-反应蛋白表达的影响[J]. 华西口腔医学杂志, 2017, 35(2): 192-197.
[14]	杨小军, 谭咏梅, 田智慧, 周婷, 赵望泓, 侯晋. 细菌感染影响牙周组织细胞表达环鸟苷-腺苷合成酶的实验研究[J]. 华西口腔医学杂志, 2017, 35(2): 203-207.
[15]	贾玲玲, 万乾炳. 基质金属蛋白酶抑制剂的研究进展[J]. 华西口腔医学杂志, 2017, 35(2): 208-214.