张凤秋1,杨连甲2,吴织芬1,秦鸿雁3
ZHANG Feng-qiu1,YANGLian-jia2,WUZhi-fen1,QINHong-yan3
摘要:
目的 构建分泌型牙龈卟啉单胞菌牙龈蛋白酶K基因的真核表达载体VR1020/KGPcd,并检测其在哺乳动物细胞中的表达及分泌情况。方法 应用基因重组方法,构建真核表达载体VR1020/KGPcd。然后用Lipofectamine 2000介导瞬时转染COS7细胞,以反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和间接免疫荧光检测重组质粒的基因转录和蛋白表达,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测培养上清中蛋白分泌情况。结果 转染的COS7细胞中可检测到目的基因的转录和表达,并且在培养的上清中检测到其表达的蛋白质。结论 成功构建了可分泌表达的真核表达载体 VR1020/KGPcd,并在哺乳动物细胞中能够正确转录和翻译,培养上清中可检测到正确表达的目的蛋白,这为其作为基因疫苗免疫动物奠定了基础。