目的　检测绿色荧光蛋白基因(EGFP)的表达载体pEGFP对MSCs的转染效率及瞬时表达,为利用 pEGFP构建骨形成蛋白(BMP)表达载体并转染骨髓基质干细胞(MSCs)提供依据。方法　在体外扩增并酶切鉴定 pEGFP质粒;抽取兔骨髓,应用贴壁法培养MSCs;质粒与脂质体按照不同的比例混合,以脂质体介导法转染pEGFP, 应用荧光显微镜观察转染效率及瞬时表达情况。结果　转染效率与脂质体和质粒的比例有关,绿色荧光蛋白在基因转染24 h后开始表达,48~72 h最高,1周后表达逐渐减弱,但3~4周后仍有少量表达。结论　按照合适的质粒和脂质体比例,pEGFP转染MSCs的效率可达到30%,并能持续表达3周以上,是转染MSCs较为理想的瞬时表达载体。

目的　观察骨髓基质细胞(MSCs)在TGF-β诱导下形成软骨的能力,以探讨其作为软骨组织工程种子细胞的可能性。方法　体外分离、培养、扩增兔MSCs,消化后移入离心管中,离心使之成为细胞团,每个细胞团含1×106个MSCs,将细胞团暴露于含20 ng/ml TGF-β的培养液中7 d,然后进行连续培养,观察细胞团的变化,于培养的14 d、28 d取出细胞团,通过体视显微镜、光镜、透射电镜观察软骨的形成情况。结果　TGF-β作用后约14 d,细胞团出现收缩,在离心管底部呈圆球状,以后逐渐增大,28 d后直径最大可达1·8 mm,表面光滑,为亮白色;HE染色显示14 d可见大量活细胞,并有细胞外基质形成,某些局部可见细胞位于陷窝内,28 d可见较多细胞位于陷窝中; 透射电镜观察显示细胞周围有大量胶原基质形成。结论　MSCs在TGF-β作用下可以形成软骨团块,表明其可以向软骨细胞定向分化,能够作为软骨组织工程的种子细胞。

目的　建立一种模拟面神经爆炸伤的动物模型。方法　麻醉下在距犬面部5 cm、10 cm、15 cm处放置雷管模拟爆轰波致伤效应,并在雷管爆炸同时,用滑膛枪发射钢珠弹致犬同侧咬肌切线伤以模拟破片致伤。分别于伤后不同时间取动物心、肺、脑观察动物伤情,并检测面神经及其核团的病理改变,分析不同距离条件下全身和局部的创伤效应。结果　5 cm致伤时动物伤情较重,尤其是心肺脑等脏器损伤严重,不能存活较长时间;10 cm致伤时动物经过抢救仍可存活,受伤的面神经干肿胀,外膜不光滑,神经干内弥漫性出血;15 cm致伤时伤情较轻,局部神经的损伤程度随距伤道的距离增加而减轻,镜下表现为广泛的神经纤维断裂、坏死,同时神经元也变性、坏死, 并有大量炎细胞弥散浸润。结论　所建立的犬破冲复合伤模型重复性好,各项致伤条件可控,因此可作为研究面神经爆炸性损伤的动物实验模型。

目的　筛选与成人牙周炎(AP)相关的唾液蛋白因子。方法　分为AP组和正常对照(NC组)两组,每组25例,收集非刺激性全唾液,采用十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法分离唾液蛋白并分析其成分。AP组牙周基础治疗后2周、4周重复采样与分析。结果　AP组治疗前唾液中66 kD、18 kD、15 kD、13 kD蛋白条带容量值,51 kD、34 kD、19 kD、17 kD蛋白条带出现率都显著高于NC组;牙周基础治疗后以上各变量都显著下降。结论　18 kD、15 kD、13 kD与AP的发生与转归有关;牙周炎症状态下唾液中血清性蛋白增加。

目的　探讨下颌骨骨折愈合过程中整合素α5表达水平的改变。方法　用兔作下颌骨骨折的动物模型,分别于骨折前1天及骨折后第1、3、5、7、14、30、60、90天取骨断端组织标本作成石蜡切片并用LsAB法进行免疫组织化学实验,以探讨整合素α5在骨组织,特别是在成骨细胞和破骨细胞中的表达。结果　整合素α5在骨组织及其周围软组织中广泛表达;从骨折后第7天出现增强,第14天到第30天表达最强,第60~第90天后接近正常。结论　在下颌骨骨折的愈合过程中,整合素α5在骨组织细胞上的表达增强,整合素α5对骨折的愈合过程具有重要作用。

目的　探讨不同的钛表面预处理对自制新型镧系低熔瓷的钛—瓷结合强度的影响,为自行研制钛瓷瓷粉体的临床应用奠定理论基础。方法　钛表面分别经不同粒度的Al2O3喷砂粗化、偶联剂处理及预氧化处理;制作棒、盘试件,用压出法测试钛—瓷间的剪切结合强度,用扫描电子显微镜(SEM)及电子探针(EPMA),从微观和相关元素方面观察钛—瓷界面。结果　80~250μm 5种不同粒度的Al2O3喷砂处理钛表面后,对钛—瓷剪切结合强度无明显影响;自制硅偶联剂使剪切结合强度降低;钛表面预氧处理对剪切结合强度无明显影响。结论　镧系低熔瓷对钛表面具有良好的湿润性;钛金属表面硅偶联剂处理或预氧化处理是不必要的;在一定范围内,剪切结合强度受钛表面粗糙度的影响较小。

目的　研究ICAM-1/LFA-1单抗阻断对口腔鳞癌肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)对自体肿瘤细胞杀伤活性及分泌TNF-α的影响。方法　从15例口腔鳞癌组织中分离TIL并培养,用流式细胞术检测新鲜分离和激活的TIL细胞上ICAM-1和LFA-1的表达水平;比较用ICAM-1/LFA-1单抗阻断前后TIL对自体肿瘤细胞杀伤活性及产生TNF-α 水平的影响。结果　激活的TIL较新鲜分离的TIL细胞ICAM-1和LAF-1的表达显著增加(P<0·05);阻断ICAM-1, TIL对自体肿瘤细胞的杀伤活性无显著改变;阻断ICAM-1和LAF-1后,TIL分泌TNF-α无显著差异(P>0·05),但TIL 对自体肿瘤细胞的杀伤活性显著降低(P<0·05)。结论　anti-LFA-1单克隆抗体(McAb)可能通过干扰抗原非特异性的粘附过程而发挥作用。

目的　评价术前三联化疗(PYM+5-Fu+DDP)配合手术治疗口腔鳞癌的临床疗效及与多药耐药性的关系。方法　采用术前三联化疗合并手术综合方案治疗口腔鳞癌患者102例,全部患者均经活检确诊。对所有患者的化疗效果进行评价,并对综合治疗的效果进行随访观察。结果　102例患者化疗有效率为82·4%。有完整随访资料者92例,存活69例,3年生存率为67·6%。结论　本三联化疗方案在口腔鳞癌综合治疗中具有用药剂量小、疗效确切等优点,可作为口腔鳞癌患者术前化疗方案之一。

目的　研究顺铂—白蛋白微球(CDDP-AMS)舌动脉导向治疗舌癌时,顺铂(DDP)在体内和肿瘤局部的释放情况。方法　采用自行研制的平均粒径为56·3μm的CDDP-AMS 100 mg(含CDDP 13·6 mg),经舌动脉推注治疗舌部鳞癌患者7例,分别测定患者外周静脉血和肿瘤切除标本组织匀浆中的铂含量,并与单纯CDDP给药组患者相比较,分析 CDDP-AMS药物释放的特点。结果　CDDP-AMS舌动脉推注治疗舌部鳞癌组,患者外周静脉血平均血药浓度在90 min时达峰值,10 d时血药浓度尚可测到;肿瘤局部药物浓度可较长时间维持恒定,到第17天时尚可测到。结论　CDDP-AMS 具有很强的缓释作用,起到了药物“贮存站”作用,达到肿瘤局部长时间高浓度、全身外周血低浓度的效果,消除了CDDP 全身大剂量用药时的毒副作用,值得推广应用。

目的　探讨影响舌鳞癌淋巴结转移危险因素在预测颈淋巴结转移中的作用。方法　以106例舌鳞癌患者原始资料为基础,取病灶最大直径、肿瘤细胞分化程度、浸润方式及组织学恶性度分级为危险因素进行统计学分析。结果　原发灶直径及肿瘤细胞分化程度与颈淋巴结转移无明显相关意义;而浸润方式及组织学恶性度分级与颈淋巴结转移有明显相关性。结论　舌鳞癌发生区域淋巴结转移的危险因素是浸润方式及组织学恶性度分级。

目的　探讨Fr¨ankelⅡ型功能矫治器对儿童上气道变化的影响。方法　随机抽取经Fr¨ankelⅡ型矫治器治疗的安氏Ⅱ类1分类错患儿20例,其中男、女各10例,年龄9~10岁,比较其X线头颅定位侧位片中上气道矢状径在治疗前后的变化。结果　治疗后,儿童骨性鼻咽(PNS-Ba)、Mcnamara线、软腭—软腭后咽壁距(SPP-SP- PW)、舌咽部最小距离(P-T)和喉咽部会厌谷—下咽壁距(V-LPW)明显增大,与腺样体有关的两项测量指标(Ad1- PNS,Ad2-PNS),以及悬雍垂-中咽壁距(U-MPW)、舌咽后气道间隙(TB-TPPW)治疗前后无显著性差异。结论　Fr¨ankel Ⅱ型矫治器能明显增加儿童上气道的矢状径宽度。

目的　研究保留颈外静脉及颈丛神经深支对颈淋巴清扫术的安全性、彻底性及术后颅内和面部静脉回流的影响。方法　20例口腔鳞癌患者均采用联合根治术并保留颈神经丛深支。按保留颈外静脉与否将患者随机分为两组,每组10例。检测患者术前、术后的面部组织间质压,免疫组织化学技术染色淋巴管并计数其密度,观察记录患者的术后主观症状。结果　保留颈外静脉组术后面部组织间质压的升高及持续时间均低于不保留组。颈部不同结构淋巴管密度的均值由高至低依次为:颈内静脉、胸锁乳突肌、副神经、颈外静脉和颈丛深支。结论　保留颈外静脉及颈丛神经深支不影响颈淋巴清扫术的安全性及彻底性,并可有效改善患者术后颅内和面部的静脉回流,保存肩功能。

目的　观察Tip-Edge差动直丝弓矫治技术治疗成人安氏Ⅱ类1分类错的效果。方法　对13例平均年龄为24·3岁的成年安氏Ⅱ类1分类患者采用Tip-Edge技术进行治疗。通过对患者治疗前后的头影测量主要数据的统计学分析,评价其治疗效果,并探讨Tip-Edge差动直丝弓技术治疗安氏Ⅱ类1分类错的机制。结果　13例患者经平均疗程为16·2个月的治疗后,均获良好的覆、覆盖及中性磨牙关系,侧面形也得到明显的改善。X线头影测量显示,患者治疗后的上下中切牙切缘距AP线的距离分别缩短3·72 mm、1·03 mm,覆盖减少3·73 mm,与治疗前比较有显著差异(P<0·01);除下中切牙明显压低外,下磨牙还出现了一定量的伸长(P<0·05)。结论　Tip-Edge技术可通过差动机制作用于成人安氏Ⅱ类1分类错患者的牙及牙槽骨,使之在维护牙周健康的同时快速而有效地达到治疗效果。

目的　评估甲苯胺蓝试剂盒Oratest诊断口腔粘膜病损的临床价值。方法　将60例疑为癌或癌前病变的口腔粘膜病损患者随机分成两组,每组30例。分别用Oratest试剂进行活体局部涂擦和含漱染色,观察其着色情况,并对照组织病理学诊断进行分析。结果　Oratest染色对口腔癌和上皮细胞异常增生诊断的灵敏度分别为 93·9%和42·9%,而含漱法与局部涂擦法活体染色检测癌变的灵敏度无统计学差异(P>0·1)。结论　Oratest活体染色可以应用于口腔癌的临床诊断,但对筛选口腔癌前病变的临床可行性仍有待进一步的研究。

目的　探讨热疗对肿瘤细胞耐药性的产生和变化的影响。方法　采用RT-PCR法比较41℃及37℃ 下Tca8113及K562/ADM细胞株在体外接受短期化疗后,在mRNA水平上多药耐药基因(MDR1)及多药耐药相关蛋白基因(MRP)的表达情况,采用荧光分光光度计检测细胞内药物浓度的变化。结果　热疗化疗联合应用对Tca8113 及K562/ADM细胞株抑制作用明显提高;41℃下热疗可在mRNA水平部分逆转K562/ADM细胞中MDR1和MRP的表达,并明显升高了K562/ADM细胞内药物浓度。结论　热疗不仅抑制肿瘤细胞耐药基因的表达,同时还有增加细胞内的药物浓度、拮抗耐药蛋白的作用,从而逆转耐药。

目的　制备猪釉质蛋白多克隆抗体,为釉原蛋白的检测提供条件。方法　选择1月龄乳猪,分离埋于上下颌骨内的牙胚,刮取牙胚表面干酪样尚未完全矿化的釉质基质,通过盐酸胍抽提及SephadexG-200柱层析分离纯化猪发育期牙胚釉原蛋白,联合免疫家兔,抗血清经DE-52纤维素纯化,并经ELISA测定抗体效价。结果　 SDS-PAGE电泳结果发现采用SephadexG-200葡聚糖凝胶过滤能达到较为理想的釉原蛋白分离纯化效果,用所提纯的猪釉原蛋白免疫家兔,成功地制得兔抗猪釉原蛋白抗血清,抗血清稀释达1∶32 000时,采用ELISA法仍有明显的抗原抗体反应。结论　本实验成功制备得到抗釉原蛋白多克隆抗体,为釉原蛋白的检测提供了条件。

目的　构建人釉原蛋白(AMG)编码区基因真核表达载体PsecTaq2A-AMG。方法　采用PCR技术体外扩增AMG完整分泌肽编码区。将扩增产物与PsecTaq2A分别用BamHI和Xhol I行双酶切,将获取的AMG目的基因片段连接到双酶切后的PsecTaq2A,构建重组质粒PsecTaq2A-AMG,并对重组质粒进行鉴定。结果　①PCR扩增产物经1·5%琼脂糖凝胶电泳,可见大小约519 bp的特异性条带,与预期结果一致。②重组克隆PsecTaq2A-AMG酶谱分析与预期结果一致,序列测定结果与GenBank中的人釉原蛋白序列完全一致。结论　用此方法可成功构建AMG 编码区基因真核表达载体PsecTaq2A-AMG。

目的　比较成人高低角骨面型颅面硬组织结构的差异。方法　对37名成人样本(高角17例、低角 20例)的53项硬组织X线头影测量指标进行测量和比较分析。结果　颅部结构中,高角组蝶鞍角(N-S-Ar)和颅底角(N-S-Ba)明显小于低角组(P<0·01)。上颌结构中,两组间腭平面倾斜度(SN-PP,FH-PP)、上颌骨相对颅底的前后位置(S-Ptm)没有明显差异,高角组上颌骨体长度(Ptm-A)小于低角组,相对于颅骨和上颌骨的平面倾斜度(SN- OP,FH-OP,PP-OP)大于低角组,高角组下颌骨体长度(Go-Po)和升支倾斜度(FH-RP)的均值小于低角组,但未发现两组间有统计学差异,同时,下颌升支高度(Co-Go)、Po-NB距及下颌颏联合厚度(klhhd)明显小于低角组。下颌平面角 (SN-MP,FH-MP,PP-MP)、关节角(S-Ar-Go)、下颌角(Ar-Go-Me)、SUM及Y轴角大于低角组。两组间前上面高(N- ANS)没有明显差异;高角组前面高(N-Me)、后上面高(S-Co)、前下面高(ANS-Me)大于低角组,后面高(S-Go)小于低角组;同时面高指数(FHI,S-Go/N-Me)、前上面高与全面高比(N-ANS/N-Me)及前上面高与前下面高比(N-ANS/ANS- Me)均小于低角组,前下面高与全面高比(ANS-Me/N-Me)大于低角组。结论　成人高低角骨面型之间颅面结构存在较大差异,特别在面下1/3。

目的　本研究旨在构建人可溶性白介素-1受体(sIL-1R)真核表达载体pcDNA3/sIL-1R,为研究骨关节病的基因治疗奠定实验基础。方法　将人sIL-1R基因的RT-PCR纯化产物及质粒pcDNA3·1(+) DNA经KpnI和 XhoI双酶切、胶回收纯化酶切片段后,体外连接酶切片段,使其定向重组,再将重组DNA转化E.coliCompetent Cells JM109,经复苏后,在含Ampr的LB固体培养基上筛选出阳性克隆。结果　挑取的LB固体培养基上的6个单菌落经酶切及测序鉴定,证实均为阳性克隆,即sIL-1R与pcDNA3·1(+)体外重组成功。结论　采用体外重组技术,成功地将人sIL-1R cDNA插入了真核表达载体pcDNA3·1(+)中。

目的　研究山羊下颌骨牵张成骨术后牵张区成骨细胞的增殖节律性。方法　选取48只健康山羊, 分为牵张成骨组和对照组2组,牵张成骨组进行牵张成骨术,术后4周,分别在0:00、4:00、8:00、12:00、16:00、 20:00时点处死两组动物,并取牵张成骨组右下颌骨颏孔区新骨组织、对照组右侧颏孔区骨组织各2 cm×2 cm× 0.5 cm进行原代细胞培养成骨细胞,采用流式细胞术对成骨细胞的增殖指数(PI)进行定量测定,并采用余弦分析法对两组细胞增殖的节律性进行分析。结果　牵张成骨组和对照组的PI均可拟合余弦曲线,牵张成骨组的调整值和振幅显著高于对照组(P<0·05),两组峰值相位无显著性差异(P>0·05),其峰值出现在19:47。结论　牵张成骨可增加成骨细胞的增殖活性,牵张后成骨细胞仍具有昼夜节律性变化。

目的　探讨尿激酶型纤溶酶原激活物(UPA)在口腔鳞癌中的表达及与侵袭、转移、预后的关系。方法　采用免疫组织化学LsAB法检测80例口腔鳞癌、10例口腔正常粘膜、10例口腔粘膜白斑中UPA的表达。结果　口腔鳞癌中UPA表达明显高于口腔正常粘膜和口腔白斑。口腔鳞癌中UPA的表达与淋巴结转移、预后、生长方式存在相关关系;有转移者表达明显高于无转移者,预后差者表达明显高于预后好者,浸润型生长方式者表达高于外生型和溃疡型生长方式者。结论　UPA表达与口腔鳞癌的侵袭、转移关系密切,有望在临床上成为判断侵袭、转移和预后指标之一。

目的　研究加热对人舌癌Tca8113细胞尿激酶型纤溶酶原激活物(UPA)表达的影响。方法　采用免疫组织化学染色和流式细胞术检测Tca8113细胞在不同加热温度下(37℃、40℃、43℃、45℃)UPA表达情况。结果　与37℃组相比,40℃、43℃组加热后Tca8113细胞UPA表达明显下降(P<0·05),而45℃组UPA表达下降,但无统计学意义(P>0·05)。结论　口腔鳞癌局部热疗不会促进侵袭、转移,还会对肿瘤的侵袭、转移有抑制作用。

目的　检测Ki-67抗原在不同组织类型成釉细胞瘤中的表达情况,以探讨不同组织类型成釉细胞瘤的细胞增殖能力差异及其相应的临床意义。方法　采用LsAB免疫组织化学方法,对70例成釉细胞瘤进行染色, 并采用Sopt及IPP图像分析系统半定量分析Ki-67阳性染色指数。结果　恶性成釉细胞瘤的阳性染色指数最高 14·72%±2·87%,其次为实性成釉细胞瘤,其中以滤泡型4·42%±1·05%高于丛状型3·64%±1·23%,单囊型最低 2·21%±1·09%。结论　Ki-67所反映的不同组织类型成釉细胞瘤的细胞增殖能力的差异,可能与其术后复发率的高低有关。

目的　探讨偏侧咀嚼对大鼠颞骨关节窝位置的影响。方法　通过拔除大鼠右侧下颌磨牙建立偏侧咀嚼动物模型,观察不同时间长度偏侧咀嚼对大鼠颞骨关节窝的矢状向和水平向位置的影响。结果　偏侧咀嚼1、 2、4个月的大鼠非咀嚼侧颞骨关节窝前缘与对侧相比有向前的移位,偏侧咀嚼2、4个月的大鼠非咀嚼侧颞骨关节窝前缘和对照组同侧相比有向前的移位,而咀嚼侧关节窝未发现明显变化。偏侧咀嚼2、4个月的大鼠非咀嚼侧颞骨关节窝有向内的移位。各个时间实验组大鼠咀嚼侧关节窝与对照组对比没有发现有统计学意义的改变。结论　偏侧咀嚼会造成非咀嚼侧颞骨关节窝向前,向内的改建。偏侧咀嚼可能是颞下颌关节紊乱症的病因之一。