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蒋欣泉,张志愿,曹俊,陈传俊,王明国,周晓健,陈万涛
JIANGXinquan,ZHANG Zhiyuan,CAO Jun,et al.
摘要:
目的 检测绿色荧光蛋白基因(EGFP)的表达载体pEGFP对MSCs的转染效率及瞬时表达,为利用 pEGFP构建骨形成蛋白(BMP)表达载体并转染骨髓基质干细胞(MSCs)提供依据。方法 在体外扩增并酶切鉴定 pEGFP质粒;抽取兔骨髓,应用贴壁法培养MSCs;质粒与脂质体按照不同的比例混合,以脂质体介导法转染pEGFP, 应用荧光显微镜观察转染效率及瞬时表达情况。结果 转染效率与脂质体和质粒的比例有关,绿色荧光蛋白在基因转染24 h后开始表达,48~72 h最高,1周后表达逐渐减弱,但3~4周后仍有少量表达。结论 按照合适的质粒和脂质体比例,pEGFP转染MSCs的效率可达到30%,并能持续表达3周以上,是转染MSCs较为理想的瞬时表达载体。