牙龈卟啉单胞菌PG0839基因突变株的构建

doi:10.3969/j.issn.1000-1182.2012.02.020

华西口腔医学杂志

牙龈卟啉单胞菌PG0839基因突变株的构建

刘静波1 潘亚萍1 李琛1 林莉1 钟鸣2，3

1.中国医科大学口腔医学院牙周病学教研室； 2.中心实验室； 3.病理科，沈阳110002

收稿日期:2012-04-25 修回日期:2012-04-25 出版日期:2012-04-01 发布日期:2012-04-01
通讯作者: 潘亚萍，Tel：024-22891701
作者简介:刘静波（1980—），女，辽宁人，主治医师，博士
基金资助:
国家自然科学基金资助项目（81070834）

Construction PG0839 gene-defective mutant of Porphyromonas gingivalis

Liu Jingbo1, Pan Yaping1, Li Chen1, Lin Li1, Zhong Ming2，

1. Dept. of Periodontology, School of Stomatology, China Medical University, Shenyang 110002, China; 2. Central Laboratory, School of Stomatology, China Medical University, Shenyang 110002, China; 3. Dept. of Oral Pathology, School of Stomatology, China Medical University, Shenyang 110002, China

Received:2012-04-25 Revised:2012-04-25 Online:2012-04-01 Published:2012-04-01
Contact: Pan Yaping，Tel：024-22891701
About author:Liu Jingbo（1980—），女，辽宁人，主治医师，博士

摘要/Abstract

摘要：

目的构建牙龈卟啉单胞菌毒力岛基因PG0839突变菌株，为研究PG0839基因功能提供实验基础。方法扩增1 584 bp PG0839基因片段，对聚合酶链反应（PCR）产物和pUC19载体进行BamH Ⅰ和EcoRⅠ双酶切，连接酶切产物得到质粒pPG0839-1。将2 101 bp erm基因产物插入到pPG0839-1中PG0839基因的EcoRⅤ位点，构建质粒pPG0839-2，作为电穿孔的供体质粒。电穿孔转化于受体菌牙龈卟啉单胞菌W83菌株，红霉素抗性培养基筛选阳性克隆，命名为PG0839基因突变菌株。结果运用插入失活方法构建PG0839基因突变菌株，进而通过酶切、测序、PR和反转录PCR对PG0839基因突变菌株进行验证，证实PG0839基因突变菌株构建成功。结论本实验成功构建PG0839基因突变菌株。

关键词: 牙龈卟啉单胞菌, 毒力岛, 基因打靶

Abstract:

Objective In order to determine the function of PG0839 gene from Porphyromonas gingivalis（P.gingivalis） W83 strains, we intended to create a mutant in the PG0839 gene by homologous recombination. Methods 1 584 bp PG0839 gene fragment was amplified, digested by BamH Ⅰ and EcoR Ⅰ, purified and ligated to pUC19. The recombinant plasmid was designated as pPG0839-1. The erm cassette（2 101 bp） was inserted into the EcoR Ⅴ restriction site of the PG0839 gene. The resultant recombinant plasmid, pPG0839-2, was used as a donor in the electroporation of P.gingivalis W83. After electroporated and selected on erythromycin brain heart infusion plates, a single colony was collected and designated as PG0839 gene-defective mutant. Results A mutant in PG0839 gene was created by insertional inactivation, and inactivation of PG0839 gene was confirmed by restriction endonuclease digestive, sequencing, polymerase chain reaction（PCR） and reverse transcription PCR. Conclusion A PG0839 gene-defective mutant was created successfully.

Key words: Porphyromonas gingivalis, pathological islands, gene targeting

刘静波潘亚萍李琛林莉钟鸣. 牙龈卟啉单胞菌PG0839基因突变株的构建[J]. 华西口腔医学杂志, doi: 10.3969/j.issn.1000-1182.2012.02.020.

Liu Jingbo1, Pan Yaping1, Li Chen1, Lin Li1, Zhong Ming2，. Construction PG0839 gene-defective mutant of Porphyromonas gingivalis[J]. West China Journal of Stomatology, doi: 10.3969/j.issn.1000-1182.2012.02.020.

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牙龈卟啉单胞菌PG0839基因突变株的构建

Construction PG0839 gene-defective mutant of Porphyromonas gingivalis

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