徐 艳1,章锦才2,张蕴惠3
XUYan1, ZHANG Jin-cai2, ZHANG Yun-hui3
摘要:
目的 构建人可溶性肿瘤坏死因子α受体(sTNFR)真核表达载体pcDNA3·1(+)/sTNFR,为研究人sTNFR 在哺乳动物细胞中的合成与表达提供条件。方法 采用体外重组技术,将sTNFR的RT-PCR纯化产物及质粒 pcDNA3·1(+) DNA经kpnⅠ和xhoⅠ双酶切、胶回收纯化酶切片段后,体外连接这两个酶切片段进行定向重组,再将重组DNA转化感受态细胞E.ColiCompetent Cells JM109。复苏后,在含氨苄青霉素的LB固体培养基上筛选阳性克隆,进行酶切及测序鉴定。结果 挑取的LB固体培养基上的6个单菌落经证实均为阳性克隆,即sTNFR与 pcDNA3·1(+)体外重组成功。结论 将sTNFR cDNA成功地插入了真核表达载体pcDNA3·1(+)中,构建了质粒 pcDNA3·1(+)/sTNFR。