人牙髓干细胞的体外培养和鉴定

华西口腔医学杂志

人牙髓干细胞的体外培养和鉴定

何飞,谭颖徽,张纲

1.第四军医大学口腔医院　牙体科,陕西　西安710032; 2.第三军医大学附属新桥医院　口腔科,重庆400037

收稿日期:2005-02-25 修回日期:2005-02-25 出版日期:2005-02-20 发布日期:2005-02-20
通讯作者: 谭颖徽,Tel:023-68774645
作者简介:何　飞(1972-),女,黑龙江人,主治医师,博士,现在第三军医大学附属新桥医院口腔科工作
基金资助:
全军医药卫生科研基金资助项目(01MA165)

Isolation and Identification of Human Dental Pulp Stem Cells

HE Fei1,TAN Ying-hui2,ZHANG Gang2

1.Dept.of Conservative Dentistry,Hospital ofStomatology,The FourthMilitaryMedical University,Xi′an710032,China; 2.Dept.ofSto- matology,XinqiaoHospital,The ThirdMilitaryMedical University,Chongqing400037,China

Received:2005-02-25 Revised:2005-02-25 Online:2005-02-20 Published:2005-02-20

摘要/Abstract

摘要：

目的　研究第三恒磨牙来源的人牙髓干细胞的表型和生物学性状。方法　从成人健康阻生牙中获取牙髓,酶消化法分离获得牙髓干细胞,计算细胞克隆形成率(CFU-F);免疫组化、RT-PCR法检测细胞的表面分子表达; 流式细胞仪测定细胞周期;体外分化诱导实验检测细胞的多向分化能力。结果　分离获得的牙髓干细胞在体外具有一定的克隆形成能力,诱导条件下部分牙髓干细胞可向脂肪、肌细胞和成牙本质细胞方向分化,符合干细胞的特征。结论　成功的从人第三恒磨牙牙髓中分离得到牙髓干细胞。

关键词: 第三磨牙, 牙髓, 干细胞

Abstract:

Objective　To isolate and identify human dental pulp stem cells from third molars.Methods　Dental pulps were dissected and digested by collagenase typeⅠand dispase. The obtained single cell supernatant were harvested and cultured. Characterization of the phenotype of DPSCswas detected by immunohistochemical method and RT-PCR assay. Cell cycle was ana- lyzed by FCM. Differentiation potential of DPSCs was evaluated.Results　Colony-forming efficiency of cells derived from dental pulp tissue was 2~15 clones/103cells plated. DPSCswere found to express many different markers, including vimentin, collagen typeⅠ, GFAP, nestin and osteocalcin, while they failed to reactwithMyoD and DSPP. About 64.1% of the cellswere in G0/G1 phases, while only 35.8% in proliferation (S+G2+M). Grown in an adipogenic cocktail medium for three weeks, some DPSCs expressed fat cell markers of PPARγand LPL, and formed oil red O-positive lipid clusters in fiveweeks. After culturewith a myo- genic-inductive medium, DPSCswere found to expressMyoD, desmin and myosin, markers ofmyocyte. Long-term cultures of DP- SCs grown in differentiation inductive medium demonstrated the capacity to form Von Kossa-positive condensed nodules with high levels of calcium.Conclusion　Cells isolated from adult human dental pulp are clonogenic, and have multipotent differentiation potential, satisfying the criteria of postnatal somatic stem cell.

Key words: the third molar, dental pulp, stem cells

何飞,谭颖徽,张纲. 人牙髓干细胞的体外培养和鉴定[J]. 华西口腔医学杂志.

HE Fei1,TAN Ying-hui2,ZHANG Gang2. Isolation and Identification of Human Dental Pulp Stem Cells[J]. West China Journal of Stomatology.

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