吴红兵1,田 聆2,文艳君2,刘玉梅3,阚 兵2,杜小波2,徐健蓉2,魏于全2
WU Hong-bing1,TIAN Ling2,WEN Yan-jun2,LIU Yu-mei3,KAN Bing2,DUXiao-bo2,XUJian-rong2,WEI Yu-quan2
摘要:
目的 构建含有hCD40L基因的重组腺病毒载体,为其在动物模型体内表达和肿瘤基因治疗提供基础。方法 用XhoⅠ、SwaⅠ双酶切质粒pORF-hCD40L,回收1 900 bp基因片段并定向克隆插入穿梭质粒pShuttle中 XhoⅠ、EcoRⅤ双酶切位点,得到重组质粒pShuttle-hCD40L。经PmeI酶切与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化 BJ5183细菌,同源重组后用选择培养基筛选阳性克隆,提取质粒PacI酶切线性化后用脂质体介导转染293细胞。酶切分析和PCR鉴定重组的腺病毒。结果 酶切分析、PCR验证表明,hCD40L基因成功克隆到腺病毒pAdEasy-1 载体中。结论 成功构建表达hCD40L基因的重组腺病毒载体,为进一步研究其在哺乳动物内表达及基因治疗提供了基础。