肖文林1 石冰2 王?2 郑谦2 黄磊2
XIAO Wen-lin1,SHI Bing2,WANG Yan2, ZHENG Qian2,HUANG Lei2
摘要:
目的构建亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)特异性小干扰RNA(siRNA)真核表达载体,体外观察其对MTHFR基因的沉默作用。方法采用基因克隆技术,将合成的特异性MTHFR RNA干扰寡核苷酸序列插入真核表达载体PsiRNA-Hh1neo_G2,构建MTHFR siRNA真核表达载体。应用核转染技术将PsiRNA-MTHFR重组质粒分别导入原代培养的小鼠胚胎腭突间充质(MEPM)细胞。48 h和5 d后用实时定量聚合酶链反应(Real-Time PCR)和Western blot技术检测MEPM细胞内MTHFR mRNA及蛋白水平的表达情况。结果成功构建PsiRNA-MTHFR真核表达载体。经检测48 h和5 d后转染PsiRNA-MTHFR的MEPM细胞MTHFR mRNA及蛋白表达均显著下调。结论构建的RNA干扰真核表达载体能明显干扰MTHFR mRNA及蛋白的表达,为进一步研究MTHFR的功能以及其调控胚胎腭突融合的机制奠定基础。