重组质粒pcDNA3/sIL-1R(I)在哺乳动物细胞中的表达

华西口腔医学杂志

重组质粒pcDNA3/sIL-1R(I)在哺乳动物细胞中的表达

徐艳,李鹏,张蕴惠,章锦才,王大章

210029　南京医科大学口腔医院口腔内科(徐　艳), 浙江省嘉兴市第一医院口腔科(李　鹏),四川大学华西口腔医院口腔内科(张蕴惠),广东省口腔医院口腔内科(章锦才),四川大学华西口腔医院口腔颌面外科(王大章)

收稿日期:2003-12-25 修回日期:2003-12-25 出版日期:2003-12-20 发布日期:2003-12-20
基金资助:
本课题为国家自然科学基金(编号3917081)及江苏省自然科学基金(编号2003422)资助项目

Expression of Constructed Eukaryotic Vectors Carrying Encoding Gene of Soluble Human Interleukin-1 Receptor in Mammalian Cells

XU Yan*,LIPeng,ZHANG Yunhui,et al.

*Department ofOralMedicine,College ofStomatology,NanjingMedical Univer- sity,Nanjing210029,China

Received:2003-12-25 Revised:2003-12-25 Online:2003-12-20 Published:2003-12-20

摘要/Abstract

摘要：

目的　检测重组质粒pcDNA3/sIL-1R(I)在哺乳动物细胞系COS-1和CHO细胞中的表达。方法　采用脂质体介导基因转染技术,将已构建的pcDNA3/sIL-1R(I)质粒DNA导入体外培养的哺乳动物细胞系COS-1和CHO 细胞中。加入G418对转染的细胞加压筛选,获得稳定转染的细胞。酶联免疫吸附实验(ELISA)对重组质粒在COS- 1和CHO细胞表达产物的含量进行检测。结果　G418筛选获得稳定转染的COS-1和CHO细胞,对照组加压后第 10~20天细胞全部死亡。转染组第15~23天汇片达80%左右。转染组细胞培养液和冻融液中sIL-1R表达量均显著高于对照组(P<0·05)。结论　以sIL-1R胞外成熟肽编码区基因作为目的基因构建的重组质粒pcDNA3/sIL-1R (I)在哺乳动物细胞系中具有表达功能。

关键词: 人可溶性白细胞介素-1受体, 哺乳动物细胞, 体外转染, 基因治疗

Abstract:

Objective　This study is to make sure if the constructed pcDNA3 carrying encoding gene of sIL-1R can be expressed in mammalian cellsin vitro.Methods　COS-1 cells and CHO cells were respectively transfected with recombinant plasmid pcDNA3/sIL-1R by liposome. The protein expression products were detected by ELISA.Results　The results indicated that the protein expression products could be detected in the cell plasma and the cell culture supernatant. The expression level in experimental groups was much higher than that in control groups(P<0·05).Conclusion　The constructed pcDNA3/sIL-1R can express interest protein in mammalian cells and this establishes the basis for future investigation on gene therapy of periodonititis and other inflammatory diseases.

Key words: human soluble interleukin-1 receptor, mammalian cells, in vivotransfer, gene therapy

徐艳,李鹏,张蕴惠,章锦才,王大章. 重组质粒pcDNA3/sIL-1R(I)在哺乳动物细胞中的表达[J]. 华西口腔医学杂志.

XU Yan*,LIPeng,ZHANG Yunhui,et al. . Expression of Constructed Eukaryotic Vectors Carrying Encoding Gene of Soluble Human Interleukin-1 Receptor in Mammalian Cells[J]. West China Journal of Stomatology.

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