刘莉,贾文祥,李学如,张再容,马巨辉,周绍兵,陈恬
LIU Li*, JIA Wenxiang, LI Xueru, et al.
摘要:
目的 构建一含绿荧光蛋白报告基因 (gfp)的防龋基因疫苗 ,利用绿荧光蛋白特有的发光性质 ,示踪防龋基因疫苗在体外的表达情况。方法 采用PCR方法 ,以质粒pPC4 1为模板 ,扩增变形链球菌表面蛋白质抗原(PAC)分子的氨基端A区 (pacA) ,以此作为基因防龋疫苗的目的基因片段 ,与质粒pEGFP_C1重组构建重组质粒pEGFPC1_pacA ,并经酶切、测序鉴定 ;重组质粒瞬时转染COS1细胞后 ,通过荧光显微镜直接观察发绿色荧光的细胞 ,流式细胞仪检测转染细胞的荧光强度, RT_PCR扩增pacA基因片段检测重组质粒的体外表达情况。结果 重组质粒中的pacA片段完全来自pac全基因序列 ,pEGFPC1_pacA构建正确 ;荧光显微镜直接观察到了发绿色荧光的细胞 ,重组质粒转染细胞的荧光强度明显高于未转染细胞的荧光强度 ,并证实了重组质粒pacA片段能在哺乳动物细胞中被转录。结论 重组质粒中的绿荧光蛋白基因以及置于gfp基因之后的防龋基因片段均能在体外同时正确表达 ,为深入研究防龋基因疫苗的安全性及有效性提供了较好的材料