过表达外源性Notch1对舌鳞癌细胞体外生长及表皮生长因子受体表达的影响

doi:10.3969/j.issn.1000-1182.2010.01.023

华西口腔医学杂志

过表达外源性Notch1对舌鳞癌细胞体外生长及表皮生长因子受体表达的影响

黄红杰1 平飞云2 胡济安3 赵士芳4

1.杭州师范大学附属医院口腔科，浙江杭州310015； 2.浙江大学附属第二医院口腔科，浙江杭州310008；3.浙江大学附属口腔医院口腔病理科； 4.口腔颌面外科，浙江杭州310006

收稿日期:2010-02-25 修回日期:2010-02-25 出版日期:2010-02-20 发布日期:2010-02-20
通讯作者: 赵士芳，Tel：0571-87217218
作者简介:黄红杰（1968—），男，浙江人，副教授，博士
基金资助:
浙江省自然科学基金资助项目（Y206192）；浙江省教育厅科研基金资助项目（20061057）

Study on the effects of overexpression of exogenous Notch1 in tongue squamous cell carcinoma cells on cell growth and expression of epidermal growth factor receptor in vitro

HUANG Hong-jie1, PING Fei-yun2, HU Ji-an3, ZHAO Shi-fang4

1. Dept. of Stomatology, The Affiliated Hospital of Hangzhou Normal University, Hangzhou 310015, China; 2. Dept. of Stomatology, The Second Affiliated Hospital of Zhejiang University, Hangzhou 310008, China; 3. Dept. of Oral Pathology, The Affiliated Stomatology Hospital, Zhejiang University, Hangzhou 310006, China; 4. Dept. of Oral and Maxillofacial Surgery, The Affiliated Stomatology Hospital, Zhejiang University, Hangzhou 310006, China

Received:2010-02-25 Revised:2010-02-25 Online:2010-02-20 Published:2010-02-20
Contact: ZHAO Shi-fang，Tel：0571-87217218

摘要/Abstract

摘要：

目的研究过表达外源性Notch1对人舌鳞癌细胞体外生长及表皮生长因子受体（EGFR）表达的影响。方法用脂质体将编码Notch1胞内域的表达质粒体外转染人舌鳞癌细胞系Tca8113细胞，用甲基噻唑基四唑法（MTT）和流式细胞仪分别检测细胞增殖活性和凋亡情况，用逆转录聚合酶链式反应和Western blot检测Notch1和EGFR的mRNA和蛋白的变化，用免疫细胞化学检测EGFR蛋白的表达。结果转染后Tca8113细胞的增殖活性降低（Р<0.05），细胞凋亡率增高（Р<0.05），Notch1表达上调（Р<0.05），而EGFR表达下调（Р<0.05）。结论体外过表达外源性Notch1抑制人舌鳞癌细胞增殖，诱导其凋亡，并下调其表皮生长因子受体的表达。

关键词: Notch1, 表皮生长因子受体, 舌鳞状细胞癌

Abstract:

Objective To investigate the effects of overexpression of exogenous Notch1 in human tongue squamous cell carcinoma（TSCC） cells on cell growth and expression of epidermal growth factor receptor（EGFR） in vitro. Methods Human TSCC cell line Tca8113 cells were transiently transfected with the eukaryotic expression plasmid pRAMICIRES2- EGFP encoding exogenous intracellular fragment of Notch1 and control plasmid pIRES2-EGFP by LipofectamineTM 2000, respectively. Untransfected parental Tca8113 cells served as control. The cell proliferation was evaluated by methyl thiazolyl tetrazolium（MTT） assay. The apoptosis was assessed by flow cytometry. The mRNA and protein levels of Notch1 and EGFR in Tca8113 cells were detected by reverse transcriptase-polymerase chain reaction （RT-PCR） and Western blot. The expression of EGFR protein in Tca8113 cells was detected by immunocytochemistry. Results MTT assay showed that the cell proliferation of Tca8113 cells transfected with pRAMIC-IRES2-EGFP was significantly inhibited as compared with controls（Р<0.05）. After transfected with pRAMIC-IRES2-EGFP for 48 h, the apoptosis rate of Tca8113 cells was significantly higher than those of Tca8113 cells transfected with pIRES2-EGFP and untransfected Tca8113 cells（Р<0.05）, and Notch1 expression was significantly increased at mRNA（Р<0.05） and protein（Р<0.05） levels, while EGFR expression was significantly decreased at mRNA（Р<0.05） and protein（Р<0.05） levels. Conclusion Overexpression of exogenous Notch1 may inhibit cell growth and down-regulate EGFR expression in TSCC cells.

Key words: Notch1, epidermal growth factor receptor, tongue squamous cell carcinoma

黄红杰平飞云胡济安赵士芳. 过表达外源性Notch1对舌鳞癌细胞体外生长及表皮生长因子受体表达的影响[J]. 华西口腔医学杂志, doi: 10.3969/j.issn.1000-1182.2010.01.023.

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过表达外源性Notch1对舌鳞癌细胞体外生长及表皮生长因子受体表达的影响

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