人脐静脉内皮细胞的分离培养和鉴定及酪氨酸激酶受体-2在其中的表达

doi:10.3969/j.issn.1000-1182.2009.06.019

华西口腔医学杂志

人脐静脉内皮细胞的分离培养和鉴定及酪氨酸激酶受体-2在其中的表达

吴世卿1 郑俊发1 曾曙光1 陈少鹏2 薛国初1 章锦才1

1.南方医科大学附属口腔医院·广东省口腔医院口腔颌面外科，广东广州510280；2.中国科学院广州生物医药与健康研究所，广东广州510663

收稿日期:2009-12-25 修回日期:2009-12-25 出版日期:2009-12-20 发布日期:2009-12-20
通讯作者: 曾曙光，Tel：13662375681
作者简介:吴世卿（1982—），女，广东人，硕士，现在南方医科大学附属顺德市第一人民医院工作
基金资助:
广东省科技计划基金资助项目（2008B030301190）；广东省科研基金资助项目（A2006115）

Culture and identify the human umbilical vein endothelial cells and investigate the expression of tyrosine kinase-2 with immunoglobulin-like and epidermal growth factor homology domains in the cells

WU Shiqing1, ZHENG Jun-fa1, ZENG Shu-guang1, CHEN Shao-peng2, XUE Guo-chu1, ZHANG Jin-cai1

1. Dept. of Oral and Maxillofacial Surgery, Guangdong Provincial Stomatology Hospital, The Affiliated Stomatology Hospital of Southern Medical University, Guangzhou 510280, China; 2. Guangzhou Institute of Biomedicine and Health, Chinese Academy of Sciences, Guangzhou 510663, China

Received:2009-12-25 Revised:2009-12-25 Online:2009-12-20 Published:2009-12-20
Contact: ZENG Shu-guang，Tel：13662375681

摘要/Abstract

摘要：

目的分离和培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs），对其进行鉴定，并探讨酪氨酸激酶受体-2（Tie-2）基因在HUVECs中的表达情况。方法用胰蛋白酶消化、分离HUVECs并对其进行培养，根据细胞生长特点、形态特征和Ⅷ因子免疫荧光组化技术对细胞进行鉴定。分别采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和SABC免疫细胞化学染色对HUVECs中Tie-2 mRNA和蛋白表达情况进行检测。结果原代培养的HUVECs约于24 h完全贴壁，4～5 d后融合成单层铺路石样结构。Ⅷ因子免疫荧光组化法证实细胞是HUVECs。RT-PCR检测到HUVECs中Tie-2 mRNA条带明显，SABC免疫细胞组化法检测到Tie-2蛋白在HUVECs胞浆、核膜中呈强阳性表达，阳性率为85％以上。结论胰蛋白酶灌流消化法可获得高纯度的HUVECs，Tie-2在HUVECs中呈强阳性表达。

关键词: 人脐静脉内皮细胞, 酪氨酸激酶受体-2, 肿瘤

Abstract:

Objective To study the cultural method and identification of human umbilical vein endothelial cells （HUVECs）, and investigate the expression of tyrosine kinase-2 with immunoglobulin-like and epidermal growth factor homology domains（Tie-2） in HUVECs. Methods HUVECs were isolated from umbilical veins by the technique of irrigative digestion, and were cultivated in plates. The cells were identified by Ⅷ monoclonal antibody. Tie-2 mRNA and protein were detected by reverse transcription-polymerase chain reaction （RT-PCR） and SABC immunocytochemistry. Results HUVECs could adhere to the plates completely after 24 hours, and confluence a monolayer 4-5 days later. The band of Tie-2 mRNA was obviously and the expression of Tie-2 protein was strongly positive by immunocytochemistry in HUVECs. The positive rate was over 85％. Conclusion Highly purified endothelial cells were isolated. And there were overexpression of Tie-2 in HUVECs.

Key words: human umbilical vein endothelial cells, tyrosine kinase-2 with immunoglobulin-like and epidermal growth factor homology domains, tumor

吴世卿郑俊发曾曙光陈少鹏薛国初章锦才. 人脐静脉内皮细胞的分离培养和鉴定及酪氨酸激酶受体-2在其中的表达[J]. 华西口腔医学杂志, doi: 10.3969/j.issn.1000-1182.2009.06.019.

WU Shiqing1, ZHENG Jun-fa1, ZENG Shu-guang1, CHEN Shao-peng2, XUE Guo-chu1, ZHANG Jin-cai1. Culture and identify the human umbilical vein endothelial cells and investigate the expression of tyrosine kinase-2 with immunoglobulin-like and epidermal growth factor homology domains in the cells[J]. West China Journal of Stomatology, doi: 10.3969/j.issn.1000-1182.2009.06.019.

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人脐静脉内皮细胞的分离培养和鉴定及酪氨酸激酶受体-2在其中的表达

Culture and identify the human umbilical vein endothelial cells and investigate the expression of tyrosine kinase-2 with immunoglobulin-like and epidermal growth factor homology domains in the cells

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